a. 基質(zhì)膠包被：
(a) 將基質(zhì)膠置于冰中并在4℃融化，使用預(yù)冷的移液管或吸頭混合基質(zhì)膠至均勻狀態(tài)。
(b) 在冰上，將基質(zhì)膠用無(wú)血清培養(yǎng)液按照1:8的比例進(jìn)行稀釋，例如取8μl基質(zhì)膠加入64μl不含血清的培養(yǎng)液中，使用預(yù)冷的吸頭混合至均勻狀態(tài)。
注：常用的稀釋比例為1:4、1:6、1:8，可根據(jù)實(shí)驗(yàn)具體情況調(diào)整稀釋比例。
(c) 取60μL上述混合溶液垂直加入細(xì)胞小室中，使其均勻平鋪在底部。
(d) 吸出未結(jié)合的基質(zhì)膠。
(e) 加入100μl不含血清的培養(yǎng)液，將培養(yǎng)板置于37℃培養(yǎng)箱孵育30分鐘，進(jìn)行水化。
(f) 去除小室中液體，檢查是否有液體穿過(guò)小室進(jìn)入到下室中，若沒有，則可用于接種細(xì)胞。
b. 細(xì)胞懸液的制備：
(a) 對(duì)細(xì)胞進(jìn)行12-24小時(shí)的饑餓處理。（非必需步驟）
(b) 消化細(xì)胞，用不含血清的培養(yǎng)液重懸，調(diào)整細(xì)胞密度為5-50萬(wàn)個(gè)/mL。
c. 細(xì)胞接種：
(a) 取500μL含10% FBS的培養(yǎng)液加入24孔板下室，用鑷子將細(xì)胞小室置于24孔板內(nèi)。
(b) 取200μL細(xì)胞懸液加入細(xì)胞小室。
(c) 將24孔板置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24-48小時(shí)。
d. 細(xì)胞固定、染色：
(a) 取出細(xì)胞小室，去除培養(yǎng)液，用棉簽輕輕擦拭基質(zhì)膠及細(xì)胞。
(b) 在24孔板干凈的孔中加入600μl 4%多聚甲醛固定液，將小室放入固定20-30分鐘。
(c) 棄固定液，PBS洗滌小室1次。
(d) 在24孔板干凈的孔中加入適量結(jié)晶紫染色液，將小室放入染色5-10分鐘。
(e) 取出小室，PBS洗滌3次。
(f) 適當(dāng)風(fēng)干后，顯微鏡下觀察并計(jì)數(shù)。
